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標(biāo)臣動(dòng)態(tài)
VDSpher OptiBio 生物大分子液相色譜分離柱
反相液相色譜柱效高、分離能力強(qiáng)、保留機(jī)理清楚，是液相色譜分離模式中使用最為廣泛的一種，對(duì)于生物大分子蛋白質(zhì)及酶的分離分析，反相液相色譜正受到越來(lái)越多的關(guān)注。
反相色譜法是以表面非極性載體為固定相，以比固定相極性強(qiáng)的溶劑為流動(dòng)相的一種液相色譜分離模式。反相色譜固定相大多是硅膠表面鍵合疏水基團(tuán)，基于樣品中的不同組分和疏水基團(tuán)之間疏水作用的不同而分離。在生物大分子分離中，多采用離子強(qiáng)度較低的酸性水溶液，添加一定量乙腈、異內(nèi)醇或甲醇等與水互溶的有機(jī)溶劑作流動(dòng)相。普通的反相色譜固定相，使用孔徑大于200-300A的硅膠鍵合烷基固定相較為普遍，聚合物基質(zhì)的反相色譜固定相也有較多應(yīng)用。
反相色譜中樣品的保留值主要由固定相比表面積、鍵合相種類和濃度決定，保留值通常隨鏈長(zhǎng)增長(zhǎng)或鍵合相的疏水性增強(qiáng)而增大，對(duì)于非極性化合物通常遵循以下規(guī)則：(弱)非鍵合硅膠 << 氰基 < C1(TMS) < C3 < C4 < 苯基 < C8 ≈ C18(強(qiáng))。溶質(zhì)保留值與固定相表面積成正比，普通載體(80-100)的表面積約為250-320m2/g，而300孔徑載體的比表面積約為60-90m2/g。當(dāng)其他條件相同時(shí)，溶質(zhì)在300孔徑(低表面積)色譜柱上的保留值大約為80孔徑色譜柱上保留值的1/4(60：250)，小孔隙柱如高保留的C18柱或石墨碳柱有利于強(qiáng)親水性樣品洗脫。樣品的保留值也可以通過改變流動(dòng)相組成或溶劑強(qiáng)度來(lái)調(diào)整，溶劑強(qiáng)度取決于有機(jī)溶劑的性質(zhì)和其在流動(dòng)相中的濃度。在反相色譜中，采用高溶劑強(qiáng)度、低極性的流動(dòng)相時(shí)可獲得較低保留值。固定相的不同也可以導(dǎo)致選擇性發(fā)生變化，氰基、苯基、C8、C18等柱的選擇性有很大差異，一般應(yīng)優(yōu)先考慮C8、C18柱，然后是氰基柱，再次是苯基柱。
反相條件下，大多數(shù)蛋白質(zhì)由于低PH、有機(jī)溶劑存在、溫度高于室溫和疏水鍵合相等綜合原因發(fā)生變性，這些化合物可能以兩種或兩種以上獨(dú)立或動(dòng)態(tài)平衡的形式存在，它們通過色譜柱的保留速度不同，導(dǎo)致譜峰展寬、變形、甚至出現(xiàn)單一蛋白有多個(gè)峰的現(xiàn)象，部分變性也易使蛋白在柱上聚集，造成被洗脫蛋白的回收率低和鬼峰。
反相色譜固定相表面烷基鏈長(zhǎng)度對(duì)蛋白質(zhì)的反相保留和蛋白質(zhì)的活性回收有很大差異，烷基鏈越長(zhǎng)(C8、C22、C30)，固定相疏水性越強(qiáng)，為使蛋白質(zhì)等生物分子洗脫，流動(dòng)相合機(jī)溶劑的含量較高，疏水性過強(qiáng)，會(huì)導(dǎo)致生物分子的不可逆吸附和生物活性損失，因此短鏈烷基固定相(C4、C8、苯基等)在生物大分子分離中表現(xiàn)出優(yōu)勢(shì)。對(duì)多數(shù)小蛋白，在低pH乙腈/水梯度下，用C3~C8色譜柱分離，使蛋白完全展開并避免聚集或沉淀，能夠得到理想的分離結(jié)果。
德國(guó)VDS Optilab色譜技術(shù)公司是具有31年開發(fā)和生產(chǎn)液相色譜柱經(jīng)驗(yàn)的企業(yè)，VDSpher OptiBio系列生物分離液相色譜柱是運(yùn)用反相液相色譜分離生物大分子化合物，產(chǎn)品品種和優(yōu)化的選擇更全面，達(dá)到和超越世界領(lǐng)先的Vydac公司同類產(chǎn)品。
VDSpher OptiBio生物分離液相填料
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